1

UNIVERSITE HASSAN II – MOHAMMEDIA
FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES
DE MOHAMMEDIA

COURS
CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE A HAUTE
PERFORMANCE (CLHP)

HPLC

Année Universitaire : 2008 - 2009

DEPARTEMENT DE CHIMIE

Pr. SAFI Mohamed
LST-TACQ/ Dépt CHIMIE/ Pr. M. SAFI/ HPLC-08

2

SOMMAIRE
I- INTRODUCTION
II- PRINCIPE DE BASE DE LA CHROMATOGRAPHIE
III- APPEREILLAGE
1) Réservoir de phase mobile et le traitement du solvant
2) Système de pompage
3) Dispositif d'injection de l'échantillon
4) Colonnes
5) Détecteurs
a) Détecteur UV-Visible
b) Détecteur spectrofluométrique
c) Détecteur réfractométrique
IV- PHASE MOBILE ET PHASE STATIONNAIRE
1) Phase mobile
2) Phase stationnaire
V - LES DIFFERENTES METHODES CHROMATOGRPHIQUES
a) Chromatographie d’adsorption
b) Chromatographie de partage liquide – liquide
c) Chromatographie d’échange d’ions
d) Chromatographie d’exclusion
e) Chromatographie d’affinité
VI-PARAMETRES FONDAMENTAUX DE LA
CHROMATOGRPHIE D’ELUTION EN COLONNE
1) Temps et Volume de rétention
2) Le facteur de capacité
3) Le facteur de sélectivité
4) Résolution d'une colonne
5) Nombres de plateaux théoriques N
VII – ANALYSES DES CHROMATOGRAMES
VIII- ANALYSES QULITATIVE ET QUANTITATIVE
1) Etalonnage externe
2) Etalonnage interne
IX – PRECAUTION GENERALE
LST-TACQ/ Dépt CHIMIE/ Pr. M. SAFI/ HPLC-08

3

I / INTRODUCTION
La première chromatographie a été réalisée en 1906 par le botaniste russe Mikhaïl Tswett et consistait à séparer les pigments (en grec :
"chromato") d'une feuille d'épinard (Tswett M. Ber. Dtsch. Chem. Ges.,
(1906) 24, 316). Tswett avait observé la séparation des colorants végétaux, dont les chlorophylles, lorsqu'il filtrait leur solution dans l'éther de pétrole, sur une colonne de carbonate de calcium. Dans ces conditions, en effet, des zones colorées vertes et jaunes se forment. Tswett constatait : "Tout comme les rayons lumineux d'un spectre, les différentes composantes d'un mélange de