TP : Enzymologie

L’objectif de ces TP est de se familiariser avec les réactions enzymatiques et d’avoir un support pratique au cours d’enzymologie. Nous aurions dû pendant les 8 heures imparties réaliser 3 TP, un sur l’activité de l’invertase, un sur l’effet d’un inhibiteur et le dernier sur les potentiels redox. Or le polarimètre étant tombé en panne lors d’un des premiers TP nous ne pourrons faire que les deux dernières manipulations.
Le travail de préparation des solutions nécessaires à la réalisation des TP étant long nous divisons notre groupe de 13 en deux de façon à ce que chaque groupe prépare les réactifs en prenant en compte le fait que le second groupe utilisera pour ses mesures les préparations du premier groupe.

Manipulation 1 : Potentiel redox et sens d’une réaction d’oxydoréduction.

On vise ici à s’assurer de la véracité des équations de Nernst dans un premier temps, et d’observer le sens dans lequel une réaction d’oxydoréduction se déroule en fonction des composés en présence dans un second temps.
Pour cela nous allons préparer différentes solutions, mesurer leur potentiel redox, les comparer avec les résultats théoriques donnés par les équations de Nernst, puis déterminer la fiabilité de ces calculs. Ensuite nous allons mélanger différentes solutions à des concentrations différentes pour voir dans quel sens celle-ci évolue.

Une seule réaction sera le thème de l’étude :

LDH
Pyruvate + NADH + H+ L-Lactate + NAD+

*Préparation des solutions :

La réaction est réversible, elle passe donc par un équilibre et de ce fait nous ne préparerons pas des solutions pures de réactifs mais contenant les deux molécules du couple à des concentrations différentes. On aura donc deux types de solutions, celles contenant du Pyruvate et du L-Lactate, et celles contenant du NADH + H+ et du NAD+. On a besoin pour chaque type de solutions de concentrations en réactifs différentes, une des deux solutions sera donc équimolaire,