TP 1 de Microbiologie II

* Echantilon de produit cosmétique : C * Souche : Pseudomonas aeruginosa (Pa) * Boite de pétri n°19

Ce 1er TP de Microbiologie va nous permettre d’évaluer la propreté microbiologique d’un produit cosmétique, d’effectuer un challenge test et également d’identifier une moisissure.

I. Analyse de la propreté microbiologique de notre échantillon

Cette étape nous permet de détecter une éventuelle contamination de notre échantillon grâce au dénombrement par ensemencement en surface de la flore totale de l’échantillon.
Mes boites gélosées contenant mon échantillon et les dilutions -1 et -2 de ce même échantillon ne montrent aucune trace de microorganisme, rien n’a poussé après mise en culture pendant 24h ce qui est normal car un produit cosmétique doit contenir un agent anti-microbien efficace.

II. Préparation de l’inoculum et ensemencement

a) Dilution

J’ai effectué la contamination artificielle de mon échantillon de telle sorte que le pot de cosmétique contienne 105 germes/ml et que le volume de mon inoculum soit inférieur ou égal à 1 % du volume total de l’échantillon à analyser. La concentration initiale de ma souche de Pseudomonas aeruginosa était de 109 germes/ml et le volume du pot de cosmétique était de 21 ml.
J’ai effectué le calcul suivant :
Ci x Vi = Cf x Vf
Sachant qu’il fallait effectuer les dilutions -1 et -2 sur la souche Pa avant de contaminer l’échantillon : Ci = 107 germes/ml
D’où : Vi = (105 x 20)/ 107 = 0,2 ml

J’ai donc inoculé l’échantillon de produit cosmétique avec un volume de 0,2 ml de la suspension diluée (-2).

b) Dénombrement de l’échantillon après addition de l’inoculum par un ensemencement en surface

Après avoir ensemencé 4 boites de PCA par l’échantillon contaminé et 3 dilutions, nous avons mis en étuve à la température optimale des germes, qui était de 30 °C pour les Pseudomonas aeruginosa.
A la fin des 24 heures d’inoculation, j’ai observé quelques