Technique d’Analyse Biologique

Université Dr. Molay tahar de SAIDA

Chromatographie (2)
Chromatographie sur Couche Mince (CCM)
La chromatographie sur couche mince ou chromatographie planaire (CCM, en anglais TLC pour Thin layer chromatography) est une technique de chromatographie couramment utilisée pour séparer des composants dans un but analytique ou préparatif.

1) Historique :
Bien que découverte en 1938, ce n’est qu’en 1958 que fut popularisée la chromatographie sur couche mince, telle que nous la connaissons actuellement. Cette technique a rapidement supplanté la chromatographie sur papier, car elle est plus rapide et est utilisée autant pour les composés polaires que non polaires.

2) Principe :
Lorsque la plaque sur laquelle on a déposé l’échantillon est placée dans la cuve, l’éluant monte à travers la phase stationnaire, essentiellement par capillarité. En outre, chaque composant de l’échantillon se déplace à sa propre vitesse derrière le front du solvant. Cette vitesse dépend d’une part, des interactions de faible énergie retenant le composant sur la plaque stationnaire et, d’autre part, de sa solubilité dans la phase mobile. Les composés se déplacent donc alternativement de la phase stationnaire à la phase mobile, l’action de rétention de la phase stationnaire étant principalement contrôlée par des phénomènes d’adsorption. Généralement, en chromatographie sur couche mince, les substances de faible polarité migrent plus rapidement que les composants polaires.

3) Applications de la CCM :
Lorsque les conditions opératoires sont connues, elle permet un contrôle facile et rapide de la pureté d’un composé organique (si l’analyse, réalisée avec divers solvants et différents adsorbants, révèle la présence d’une seule substance, on peut alors considérer que cet échantillon est probablement pur).
Elle est utilisée pour rechercher les meilleures phases stationnaires et mobiles, avant d’entreprendre une séparation par